Когда «работает» не все: определение чувствительности к антибиотикам
Всемирная организация здравоохранения заявляет: «Устойчивость бактерий к антибиотикам возрастает до угрожающе высоких уровней во всем мире». В таких условиях даже «банальный» отит или тонзиллит может приобретать затяжное, осложненное течение, не говоря о риске в отношении потенциально летальных инфекций. Как выяснить какой препарат эффективен против «своей» патогенной флоры? И какой анализ выбрать?
«Классический» способ
Некоторые представители бактериальной флоры обладают поразительной способностью к мутациям. Бактерии, еще вчера чувствительные к простому пенициллину, сегодня – «не реагируют» на куда более «продвинутые» антибиотики.
Поэтому в современной медицине лечение бактериальных процессов без понимания особенностей возбудителя представляется «занятием» сомнительным и бесперспективным. В лучшем случае, воспаление просто «затихнет» на короткое время, а в худшем – разовьется до угрожающих жизни масштабов.
Особенно опасна такая ситуация в отношении хирургических больных, новорожденных и людей с ослабленным иммунитетом, а также тех, для кого прием антибиотиков стал нормой жизни.
Микробиологические способы идентификации возбудителей уже давно используются медициной всего мира, а современные анализаторы сделали этот процесс быстрее и эффективнее.
Так, посев на флору с определением чувствительности к антибиотикам позволяет не только «узнать» бактерии, но и проверить их чувствительность к стандартному (6-8) или расширенному (до 12) спектру антибиотиков.
В результате будет указан не только вид бактерий, но и их количество и реакция на препарат:
Правда у анализа есть и недостатки:
Новое поколение
Потребность медицины в быстром и качественном микробиологическом исследовании «подтолкнула» науку к созданию метода MALDI-TOF MC, удостоенного Нобелевской премии в 2002 году.
Метод основан на идентификации уникального белкового состава бактерий, представляющего собой своего рода «отпечаток пальца». Его точность достигает 98%. А в анализатор заложена информация более чем о 750 видах клинически значимых микроорганизмах, с возможностью «обновления базы данных».
Кроме того, примененеие идентификации MALDI-TOF MC в составе комплексных исследований позволяет проверить чувствительность микрофлоры к 18-20 препаратам, против максимально-возможных 12 у предыдущих «поколениях» посевов. В результате анализа теперь можно увидеть не только эффективность антибиотика, но и подобрать по протоколу минимальную действующую дозу препарата.
Метод полностью автоматизирован, что исключает влияние человеческого фактора на результат. А готовность исследования составляет максимум 4 дня.
Анализ на чувствительность к антибиотикам
На сегодняшний день в медицине есть 3 метода определения чувствительности микробов к антибиотику:
По сути, вне зависимости от выбранного метода, анализ на чувствительность к антибиотикам сводится к выделению возбудителя болезни в чистой культуре с дальнейшим определением спектра чувствительности к тем или иным антибиотикам. Обязательно анализ на антибиотики делается с микроорганизмов, выделенных из первично стерильных жидкостей, органов и тканей человека (кровь, спинномозговая жидкость, моча, микрофлора влагалища и уретры).
В результате проведенного исследования составляется антибиотикограмма – это список антибиотиков, к которым чувствителен или не чувствителен исследуемый микроорганизм, единица измерения при этом – минимальное количество антибиотика, необходимое для уничтожения возбудителя болезни.
Все микробы подразделяются на 3 категории в зависимости от их устойчивости к антибиотикам:
В зависимости от результатов исследования на чувствительность к антибиотикам, врач назначает необходимые препараты, их дозы и продолжительность приема для оптимального лечения заболевания. Однако следует помнить, что чувствительность микробов «in vitro» (в пробирке) и «in vivo» (в живом организме) – это разные вещи. Здесь важно знать не то, какая концентрация микробов в пробирке с питательной средой, а их количество именно в пораженном органе. Сегодня технологии, с помощью которой можно было бы делать посев прямо из очагов болезни, нет, поэтому, несмотря на достаточно высокую точность анализов, следует помнить, что выявленная чувствительность к антибиотикам не всегда совпадает с реальностью, и на это должен сделать поправку врач, чтобы не допустить неэффективного приема пациентом антибиотиков.
Посев мочи на антибиотики
Бактериологический посев на чувствительность к антибиотикам делается из образцов изначально стерильных жидкостей. Остановимся на двух из них – моче и крови.
1. Анализ мочи на антибиотики – это метод, применяемый для диагностики инфекций в мочевыделительной системе человека, приводящих к возникновению цистита, уретрита, пиелонефрита, а также при диабете и дефиците иммунной системы.
Показания к проведению посева мочи:
Для анализа на чувствительность к антибиотикам необходимо собрать утреннюю порцию мочи в специальную стерильную емкость, выпустив первые и последние капельки. Руки и половые органы перед сбором мочи следует тщательно вымыть. При таком способе забора мочи в лабораторию попадет максимальная концентрация микроорганизмов в случае их наличия у пациента. Будьте внимательны, сообщите врачу, если в последние дни перед сдачей анализов Вы принимали антибиотики – это может дать ложноотрицательный результат исследования. Продолжительность исследования – от одного до десяти дней в зависимости от типа микробов. За это время образец мочи подвергает различным анализам, и в результате определяется возбудитель инфекции, а также уровень его чувствительности к тем или иным антибиотикам, что помогает врачу принять правильное решение о назначении препарата.
2.Анализ крови на антибиотики также призван дать ответ на вопрос, есть ли в крови пациента бактерии. Бактериемия, то есть зараженность крови микробами – очень опасное явление, с этим шутить не стоит. Забор крови происходит до начала приема антибиотиков, поскольку они могут вызвать неправильный отрицательный результат.
Кровь берут из вены при помощи одноразового катетера в количестве 5 – 10 мл, ее помещают в специальную стерильную бутыль с резиновой пробкой, в которой приготовлена питательная среда для бактерий. Обычно результат известен уже через 16 – 18 часов, однако в случае, если бактерии относятся к медленно растущим видам, тогда за образцом крови наблюдают несколько дней до момента, когда рост бактерий становится очевидным.
После того, как установлены типы микроорганизмов в крови пациента, начинается исследование их на устойчивость к антибиотикам. В окончательный результат записывают идентифицированные виды бактерий в крови, а также сведения об их устойчивости к антибиотикам.
Результаты бактериологического посева крови могут быть следующими:
На этом исследование крови на антибиотики заканчивается, результат передается врачу, и он принимает решение о назначении тех или иных антибиотиков для лечения выявленного заболевания.
Чувствительность к амп что значит
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ
К АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫМ ПРЕПАРАТАМ
Дата введения: с момента утверждения
1. РАЗРАБОТАНЫ: Центральным научно-исследовательским институтом эпидемиологии (Н.А.Семина, С.В.Сидоренко); Государственным научным центром по антибиотикам (С.П.Резван, С.А.Грудинина); Научно-исследовательским институтом антимикробной химиотерапии Смоленской государственной медицинской академии (Л.С.Страчунский, О.У.Стецюк, Р.С.Козлов, М.В.Эйдельштейн); Кафедрой микробиологии и химиотерапии Российской медицинской академии последипломного образования (Е.А.Ведьмина, Л.Г.Столярова, И.В.Власова); Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (З.С.Середа).
3. ВВЕДЕНЫ ВЗАМЕН «Методических указаний по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузии в агар с использованием дисков», утв. Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР В.Е.Ковшило 10 марта 1983 г. N 2675-83.
1. Область применения
1.1. В настоящих методических указаниях изложены стандартные методы определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам (методы серийных разведений и диско-диффузионный метод).
1.2. Методические указания предназначены для применения в микробиологических лабораториях учреждений государственной санитарно-эпидемиологической службы и здравоохранения.
2. Общие сведения
Однако внедрение в клиническую практику значительного количества новых АБП и появление новых механизмов антибиотико-резистентности у микроорганизмов потребовало более строгой стандартизации процедуры тестирования, разработки новых подходов к интерпретации результатов, внедрения современной системы внутреннего контроля качества на каждом этапе исследования.
В настоящих методических указаниях систематизированы современные подходы к определению чувствительности бактериальных возбудителей инфекционных заболеваний человека, учитывающие рекомендации Европейского комитета по определению чувствительности к антибиотикам, а также Национального комитета по клиническим лабораторным стандартам США.
Исследования чувствительности микроорганизмов к АБП осуществляются для решения следующих задач:
— обоснование целенаправленной индивидуальной антибактериальной терапии для лечения конкретной инфекционной болезни отдельным пациентам;
— обоснование эмпирической терапии отдельных нозологических форм инфекционных болезней в пределах лечебных учреждений или географических регионов;
— осуществление наблюдения за распространением антибиотико-резистентности в отдельных учреждениях или географических регионах;
— исследование новых химических соединений на наличие антибактериальной активности.
3. Показания для исследования чувствительности микроорганизмов
к антибактериальным препаратам
В ходе повседневной деятельности в бактериологических лабораториях из различных биологических материалов и объектов внешней среды выделяют множество бактерий, относящихся к различным таксономическим группам. Однако определение чувствительности выделенных микроорганизмов к АБП показано далеко не во всех случаях. Определение показаний для исследования чувствительности микроорганизмов к АБП является обязанностью врача-бактериолога.
Определять чувствительность к АБП представителей нормальной микрофлоры человека, при их выделении из естественных мест обитания, бактерий, выделенных из объектов внешней среды, за исключением случаев проведения специальных исследований, нецелесообразно.
Обязательному исследованию на чувствительность к АБП подлежат все микроорганизмы, выделенные из первично стерильных жидкостей, органов и тканей человека. В остальных случаях оценке чувствительности должна предшествовать оценка клинической значимости выделенного микроорганизма.
Определение чувствительности выделенного штамма микроорганизма показано, если уровень его устойчивости к АБП не может быть предсказан на основании данных идентификации или вероятной таксономической принадлежности микроорганизма. Практически важной задачей является выявление приобретенной резистентности к АБП у природно-чувствительных к ним микроорганизмов. Подтверждение природной чувствительности или резистентности микроорганизма к АБП не является целью практических исследований.
Исследованию по оценке антибиотикочувствительности подлежат чистые культуры микроорганизмов или материал изолированных колоний с плотных питательных сред после первичного посева образца клинического материала, в последнем случае параллельно необходимо провести идентификацию культуры.
При обнаружении на плотных питательных средах после первичного посева смешанной культуры исследовать антибиотикочувствительность до идентификации и оценки этиологической значимости отдельных микроорганизмов нецелесообразно.
Прямое определение чувствительности с использованием клинического материала (без выделения чистой культуры) возможно только в исключительных случаях при условии подтверждения однородности культуры и высокой степени обсемененности при окраске по Граму, причем исследование следует повторить после выделения чистой культуры микроорганизма.
Следует уделять особое внимание определению чувствительности микроорганизмов, относящихся к таксономическим группам, для которых характерна высокая частота распространения приобретенной резистентности.
Факты выявления резистентности у микроорганизмов, для которых этот феномен ранее не был описан в научной литературе, следует оценивать с крайней осторожностью и рекомендуется обращаться за консультациями в лаборатории, занимающиеся изучением антибиотико-резистентности.
Не следует в практических целях исследовать микроорганизмы, для которых методы определения чувствительности в настоящее время не стандартизованы и отсутствуют критерии интерпретации результатов. Результаты, полученные в данном случае, не могут служить основанием для назначения антибактериального препарата, если соответствующая нозологическая форма не приведена в утвержденной инструкции по его применению.
4. Методы определения чувствительности микроорганизмов
к антибактериальным препаратам
4.1. Общая характеристика методов
Современные стандартизованные методы определения чувствительности микроорганизмов к АБП подразделяют на методы серийных разведений и диффузионные.
Для определения МПК заданные концентрации АБП вносят в питательную среду, которую затем засевают культурой исследуемого микроорганизма и после инкубации оценивают наличие или отсутствие видимого роста.
В зависимости от характера используемой питательной среды различают методы серийных разведений в агаре или в бульоне. В зависимости от объема используемой жидкой питательной среды выделяют методы серийных макро- и микроразведений.
Разновидностью метода серийных разведений является также метод, основанный на использовании только двух концентраций АБП, соответствующих пограничным значениям МПК (см. ниже). Этот принцип исследования широко используется в автоматизированных системах для определения чувствительности микроорганизмов.
Диффузионные методы определения чувствительности основаны на диффузии АБП из носителя в плотную питательную среду и подавлении роста исследуемой культуры в той зоне, где концентрация АБП превосходит МПК.
В настоящее время существуют две основные модификации диффузионного метода: диско-диффузионный и Е-тест.
В диско-диффузионном методе в качестве носителя АБП используют бумажный диск. Образование зоны подавления роста происходит в результате диффузии АБП из носителя в питательную среду. В определенных пределах величина диаметра зоны подавления роста обратно пропорциональна МПК. Однако диско-диффузионный метод позволяет лишь косвенно судить о величине МПК, а результатом исследования является отнесение микроорганизма к одной из категорий чувствительности (чувствительный, промежуточный или резистентный).
Е-тест представляет собой узкую полоску полимера (0,5х6,0 см), на которую нанесен градиент концентраций АБП (от минимальных до максимальных). Подавление роста микроорганизма вокруг полоски Е-теста происходит только в той зоне, где концентрация АБП, диффундирующего из носителя, выше МПК, при этом образуется каплевидная зона ингибиции. Значения концентрации АБП в каждом участке носителя типографским способом нанесены на наружной (обращенной к исследователю) поверхности Е-теста. Величину МПК учитывают в том месте, где граница зоны подавления роста вплотную подходит к носителю. Детальные инструкции по определению чувствительности с использованием Е-тестов прилагаются изготовителем к набору реактивов.
4.1.1. Основные этапы проведения тестирования
Оценка антибиотикочувствительности, независимо от конкретного метода, предполагает последовательное выполнение нескольких этапов:
— приготовление питательных сред;
— приготовление суспензии исследуемых микроорганизмов (инокулюма);
— учет и интерпретация результатов, формулировка рекомендаций по лечению.
Диффузионные методы включают также этап наложения дисков или полосок Е-теста на плотную питательную среду.
4.1.2. Приготовление питательных сред для определения чувствительности
Для оценки чувствительности используют специально предназначенные для этой цели среды, разрешенные к применению в Российской Федерации в установленном порядке и по своим характеристикам удовлетворяющие требованиям, приведенным в разделе 5. Внутрилабораторный контроль качества среды проводят при использовании всех сред, разрешенных к применению в Российской Федерации в установленном порядке.
Вид питательной среды для оценки чувствительности определяют выбранным методом проведения исследования (агар или бульон), а также видом тестируемого микроорганизма.
Выбранную питательную среду для определения чувствительности готовят из сухой среды промышленного производства в соответствии с инструкцией изготовителя. После автоклавирования питательную среду сразу же разливают в стерильные пробирки или в чашки Петри, или (если необходимо) колбы со средой помещают на водяную баню при 48-50 °С, где выдерживают до достижения указанной температуры, после чего в них асептически вносят термолабильные питательные добавки и/или рабочие растворы антибиотиков, а затем разливают в пробирки или в чашки Петри.
4.1.3. Приготовление суспензии исследуемых микроорганизмов (инокулюма)
Общим и принципиально важным для всех методов тестирования является стандартизация суспензии исследуемого микроорганизма, ее концентрация должна составлять 1,5·10 КОЕ/мл. Практически наиболее приемлемым методом оценки концентрации бактериальной суспензии является измерение ее оптической плотности. Оптическая плотность бактериальной суспензии с концентрацией 1,5·10 КОЕ/мл при визуальном контроле соответствует стандарту мутности 0,5 по МакФарланду. Контроль оптической плотности суспензии можно также осуществлять спектрофотометрически (денситометрически). Существуют коммерчески доступные стандарты мутности и спектрофотометры. Бактериальную суспензию можно готовить либо из бульонной, либо из агаровой культуры.
Приготовление инокулюма из агаровой культуры
Для приготовления инокулюма используют чистую суточную культуру микроорганизмов, выросших на плотных питательных средах. Отбирают несколько однотипных, четко изолированных колоний, выросших на неселективных плотных питательных средах. Петлей переносят незначительное количество материала с верхушек колоний в пробирку со стерильным физиологическим раствором или питательным бульоном, доводя плотность инокулюма точно до 0,5 по стандарту МакФарланда. Инокулюм следует использовать в течение 15 мин после приготовления.
Приготовление инокулюма из бульонной культуры
При определении чувствительности быстро растущих бактерий с обычными питательными потребностями для приготовления инокулюма также можно использовать 5-6-часовую бульонную культуру микроорганизма. Для этого отбирают несколько однотипных изолированных колоний, петлей переносят незначительное количество материала в пробирку с 4,0-5,0 мл жидкой неселективной питательной средой. Инкубируют при 35 °С. Через 5-6 ч инкубации плотность микробной суспензии приблизительно соответствует необходимой, и ее точно доводят до 0,5 по МакФарланду путем добавления стерильного бульона или физиологического раствора.
Стандарт МакФарланда может быть либо приобретен, либо приготовлен в лаборатории.
4.1.4. Приготовление стандарта 0,5 по МакФарланду
К 0,5 мл раствора ВаСl в концентрации 0,048 моль/л (1,175% раствор ВаСl ·2H O) медленно при тщательном перемешивании добавить 99,5 мл раствора H SO в концентрации 0,18 моль/л (1%) до получения гомогенной суспензии.
Правильность приготовления суспензии необходимо проверить на спектрофотометре. Поглощение при использовании кюветы 1 см должно составить 0,08-0,10 при длине волны 625 нм.
Полученную суспензию необходимо разлить по 4-6 мл в пробирки с герметично закрывающимися крышками. Пробирки должны быть такого же диаметра, как и используемые для приготовления бактериальной суспензии.
Хранить пробирки с суспензией необходимо в темноте при комнатной температуре.
Перед использованием пробирки необходимо тщательно встряхивать и оценивать однородность суспензии. При появлении видимых частиц пробирки изымаются из употребления.
Стандарт мутности необходимо обновлять или проверять его оптическую плотность ежемесячно.
4.2. Методы серийных разведений
4.2.1. Приготовление растворов АБП для методов серийных разведений
Посев на микрофлору (идентификация агента и чувствительность к а/б)
Описание исследования
Посев отделяемого верхних дыхательных путей
Тестирование позволяет определить возбудителя инфекции и выбрать для лечения наиболее действенный антибиотик.
Достаточно часто причинами болезней верхних дыхательных путей (в частности, ринита или синусита (поражения носа), фарингита (слизистой оболочки горла)), является воздействие микроорганизмов:
Своевременная постановка диагноза с точным определением агента инфекции способствует проведению адекватного лечения, что в свою очередь, не позволяет перейти заболеванию из острой в хроническую форму.
Цель исследования – выявление микроорганизмов:
основных возбудителей инфекции, условно-патогенных бактерий:
представителей нормальной флоры:
Цель тестирования – выделение следующих возбудителей инфекции:
Посев раневого отделяемого и тканей
Результаты данного тестирования используются для назначения эффективного лечения ран с применением антибиотиков.
Часто сложные раны не лечатся должным образом, причиной чему во многих случаях является неправильное назначение антибиотиков.
Достаточно часто гнойно-воспалительные осложнения ран возникают из-за воздействия условно-патогенных бактерий. Однако еще более частыми возбудителями выступают бактерии, которые не нуждаются для нормальной жизнедеятельности в кислороде (частично или полностью). Общее название таких микроорганизмов – анаэробы. Осложнения ран вызывается некоторыми их представительями – грамотрицательными (неокрашиваемыми при проведении характерной реакции окрашивания по Граму) палочками, грамположительными (окрашиваемыми) кокками, не образующими спор палочками. При проявлении одинаковых симптомов осложнения и идентичности обнаруженных бактерий, реакция их на антибиотики у разных людей может иметь существенные различия.
Действенность лечения антибиотиками на данный момент оставляет желать лучшего. Однако точная идентификация микроорганизмов и определение их чувствительности к антибиотикам позволяет сделать процесс намного действеннее.
Цель исследования – выделение следующих возбудителей инфекции:
Важно. При отборе пробы необходимо иметь наготове транспортную среду.
Посев отделяемого (соскоба) из глаза
Исследование проводится с целью выделения следующих возбудителей:
— золотистого стафилококка (Staphylococcus aureus)
— эпидермиального стафилококка (Staphylococcus epidermidis) и некоторых других видов;
— пневмококков (Streptococcus pneumoniae);
— пиогенного стрептококка (Streptococcus pyogenes);
— стрептококка вириданс (Viridans streptococcus);
— кандиды (Candida) (чаще всего);
— кишечной палочки (Escherichia coli)
— нейссерии (Neisseria species);
— протея (Proteus vulgaris);
Посев отделяемого половых органов или соскоба из влагалища, цервикального канала, мочеиспускательного канала
Тест предназначен для идентификации бактерий, вызвавших неспецифическое инфекционно-воспалительное заболевание (т.е. когда агент инфекции, послуживший причиной его возникновения, не известен), и назначения по его результатам действенного лечения с применением антибиотиков.
В нормальном состоянии биоценоз (совокупность микроорганизмов, представляющих микрофлору) мочеполовой системы человека представлен более-менее постоянным, иногда зависящим от возраста, составом. Так, микрофлора влагалища женщин репродуктивного возраста в значительном количестве содержит строгие (облигатные – гибнущие при попадании в кислородную среду) и факультативные (которые могут существовать как с присутствием кислорода, так и без него) анаэробные организмы, большинство из которых – лактобациллы. В значительно меньшей мере его населяют аэробные (нуждающиеся для жизнедеятельности в нормальном содержании кислорода) и микроаэрофильные (которым достаточно сниженной концентрации кислорода) условно-патогенные бактерии. Во внутреннем канале шейки матки и в самой матке бактерии в нормальном состоянии отсутствуют.
Микрофлора девочек, не вступивших в фазу полового созревания, представлена кокками и дифтероидами (грамположительными палочками).
В ближних к наружному выходу отделах уретры (мочеиспускательного канала) здоровых мужчин могут присутствовать небольшие количества грамположительных палочек и кокков. В проксимальных (удаленных от выхода) отделах уретры, простате и семявыводящих канальцах в норме стерильно.
Если нарушается баланс между видами микроорганизмов и/или появляются несвойственные для данного места бактерии, это создает серьезную предпосылку для возникновения инфекционно-воспалительного процесса.
Болезни, характерные для женщин:
Болезни, часто встречающиеся у мужчин:
Результатом исследования является выделение условно-патогенных бактерий (т.е. тех, которые могут являться частью нормальной микрофлоры, но при ослаблении иммунитета становятся возбудителями заболеваний): энтеробактерий, стрептококков, стафилококков, гемофильных палочек, неферментирующих грамотрицательных бактерий, энтерококков, коринеформных бактерий, дрожжеподобных грибов (только констатируется факт их присутствия, виды не определяются).
Внимание! Исследование наличия специфических возбудителей – хламидий (Chlamydia trachomatis), влагалищной трихомонады (Trichomonas vaginalis), бледной спирохеты (Treponema pallidum), гонококка (Neisseria gonorrhoeae) в рамках данного теста не проводятся.
Посев отделяемого из уха
Данный тест предназначен для микробиологической диагностики гнойно-воспалительных заболеваний уха.
Гнойно-воспалительные процессы отличаются локализацией, их могут вызывать различные возбудители. По расположению очага болезни различают поражение:
Причиной заболеваний выступают следующие микроорганизмы:
Для быстрого выздоровления пациента, а также дл предотвращения перехода болезни из острой формы в хроническую, очень важно идентифицировать возбудитель и определить его чувствительность к антибиотикам.
Посев проводится для проверки наличия грамотрицательных бактерий, относящихся к семейству энтеробактерий (Enterobacteriaceae), синегнойной палочки (Pseudomonas aeruginosa), стафилококков, стрептококков (S. pyogenes, S. pneumoniae, S. viridans), коринебактерий, дрожжеподобных грибов, гемофильной палочки (Haemophilus influenzae).
Посев пункционного материала
Целью посева является выделение следующих возбудителей:
Для исследования отбираются пробы:
Посев на анаэробную микрофлору
Цель исследования – обнаружить присутствие микроорганизмов, живущих и растущих без доступа кислорода, при гнойно-воспалительных процессах.
Анаэробные бактерии благополучно живут в организме человека, составляя значительную часть его микрофлоры. Однако определенные условия могут сделать их причиной гнойных воспалений.
Независимо от того, в какой части тела расположен очаг, действие анаэробов не отличаются разнообразием – это гниение и газообразование. Чаще всего мишенью микроорганизмов становятся органы, в которых они обитают, вследствие чего происходит поражение мочеполовой системы, желудочно-кишечного тракта, верхних дыхательных путей. Проведение точной диагностики является жизненно необходимым – только это поможет назначить адекватное лечение и обезвредить инфекцию, представляющую смертельную опасность для организма человека.
Инфекция возбуждается превотеллами, вейлонеллами, клостридиями, пропионобактериями, эубактериями, пептострептококками, актиномицетами, фузобактериями, гемеллами, бифидобактериями, бактероидами, порфиромонадами.
При обследовании проводится тестирование:
Подготовка к исследованию
Отделяемое (соскоб) верхних дыхательных путей
Отбирать материал рекомендуется до приема пищи и питья, полоскания и прочих лечебных манипуляций или через 2 часа (минимум) после еды и питья. Отбор пробы проводится до начала приема антибиотиков, антисептиков, грибковых препаратов. При назначении специфической антибактериальной химиотерапии материал отбирается до ее проведения или не ранее, чем через сутки после введения препарата.
Для хранения и транспортировки отделяемого верхних дыхательных путей используется стерильный медицинский контейнер. До доставки в лабораторию он должен храниться в холодильнике.
Подписывая контейнер, необходимо указать ФИО, дату рождения, дату отбора пробы и откуда она была взята.
Взятие соскоба с задней стенки глотки или полости носа производится специальным тампоном, который помещается затем в транспортную систему со средой Амиеса (перед отбором пробы из носа необходимо удалить сухие корочки).
Тестирование нужно проводить перед применением противомикробных препаратов. Порция желчи, отобранная при операции, наиболее соответствует требованиям, предъявляемым к качеству биоматериала.
Если есть подозрения, что воспаление спровоцировано Клостридией перфрингенс (Clostridium perfringens), бактероидами Фрагилис (Bacteroides fragilis), пептострептококками (Peptostreptococcus sp), то рекомендуется посев на анаэробную микрофлору с определением чувствительности возбудителей к антибиотикам.
Посев раневого отделяемого и тканей
Обследование проводится до начала лечения антибиотиками.
Если у пациента рана от укуса, глубокая угревая сыпь, паронихия (воспаление околоногтевого валика), некротический фасциит (поражение бактериями соединительной оболочки – фасции и подкожной клетчатки), пролежни, газовая гангрена, то перед данным тестированием рекомендуется провести предварительные обследования: посев на анаэробы (бактерии, полностью или частично не нуждающиеся в кислороде) и бактериоскопия мазка на стекле.
При проведении обследования необходимо выполнять следующие требования:
Посев отделяемого (соскоба) из глаза
Отбор отделяемого для исследования производит лечащий врач или сам пациент. Обследование назначается до приема антибиотиков.
Соскоб отбирается с конъюнктивы глаза, с переходной складки при вывернутом верхнем или нижнем веке. Для этого используется специальный тампон, который после отбора пробы помещается в емкость с транспортной средой. При проведении специфической антибактериальной химиотерапии проба отбирается до ее начала или через сутки после введения препарата.
В рамках данного теста не исследуется наличие вирусов и хламидий.
Посев отделяемого половых органов
Проведение обследования на фоне приема антибиотиков не информативно. Материал отбирается до его начала или через полторы-две недели после окончания лечения антибактериальными препаратами или иммуномодуляторами.
Нецелесообразно проводить обследование женщин во время менструации, так как количество микроорганизмов в этот период значительно меньшее, чем обычно. Биоматериал отбирается, начиная с 5-7 дня от начала цикла.
Перед проведением тестирования:
Обследование не проводится после инструментального, мануального, ультразвукового исследований, физиопроцедур, кольпоскопии и прочих манипуляций.
У мужчин исследуется эякулят (сперма). Биоматериал собирается в контейнер с крышкой. Для сбора эякулята не используются:
Это объясняется тем, что вещества, в них присутствующие (используемые при производстве презервативов или оставшиеся в контейнере после дезинфекции) могут повлиять на результат обследования.
До доставки в лабораторию, контейнер с образцом хранится в холодильнике при температуре от +2 до +8⁰С, но не более 10-12 часов. Охлажденный эякулят должен быть доставлен для исследования в день сбора (в качестве «холодильника» при транспортировке может быть использован термос с небольшим количеством льда или пакет с охлаждающими элементами).
Соскоб из мочевого канала (уретры) обирается через 1,5-2 часа после мочеиспускания или перед ним. Отбор пробы рекомендуется проводить до начала специфической антибактериальной химиотерапии или не менее чем через сутки после последнего введения лекарственного средства.
Посев отделяемого из уха; посев пункционного материала
Исследование не целесообразно проводить на фоне лечения антибиотиками, применения антисептиков и противогрибковых средств.
Материал для посева собирается только в стерильные контейнеры.
Транспортные среды перед использованием хранятся в холодильнике. Они подогреваются до комнатной температуры за полчаса до применения. Для каждого вида исследования предназначена особая транспортная среда.
Контейнер (или пробирка) с биоматериалом обязательно подписывается. Необходимо указать фамилию и инициалы пациента, дату рождения, дату, время сбора материала, и откуда взята проба.
Хранение отобранного материала должно производиться согласно требованиям, предъявляемым к режиму и срокам.
Посев на анаэробную микрофлору
Обследование не рекомендуется проводить на фоне антибактериальной терапии.
Посев на аэробные микроорганизмы целесообразно проводить параллельно с посевами на микрофлору в условиях отсутствия кислорода и проведением микроскопического исследования мазка, сделанного отдельным стерильным тампоном на стекле. На бланке направления обязательно делается запись, если исследование предназначено для выявления клостридий (бактерий, живущих и растущих только при отсутствии кислорода) и актиномицетов (микроорганизмов, соединяющих в себе признаки грибов и бактерий).
Показания к исследованию
Посев отделяемого верхних дыхательных путей
Посев раневого отделяемого и тканей
Посев отделяемого (соскоба) из глаза
Тестирование назначается при наличии гнойно-воспалительных заболеваний глаз:
Особую группу риска составляют лица, пользующиеся контактными линзами.
Посев отделяемого половых органов (соскоб)
Посев отделяемого из уха
Показанием к проведению теста является наличие гнойных и негнойных отитов (воспаления уха).
Посев пункционного материала
Тестирование назначается при наличии гнойно-воспалительных заболеваний:
Посев на анаэробную микрофлору
Тестирование рекомендуется проводить:
Интерпретация исследования
Посев отделяемого верхних дыхательных путей
Результат обследования выдается на бланке лаборатории. Пациент получает следующую информацию:
В зависимости от вида обнаруженных возбудителей предлагается перечень противомикробных средств.
Если в результате посева дала рост в незначительном количестве нормальная, условно-патогенная или сопутствующая флора, то исследование на чувствительность к антибиотикам не проводится.
Данные, предоставляемые пациенту после обследования, содержат следующую информацию:
Выбор антимикробных средств производится в зависимости от идентифицированных бактерий.
Данное обследование не предназначено для определения вида грибов и их чувствительности к антигрибковым препаратам. Если возникает подозрение на грибковую инфекцию, проводится отдельное тестирование (посев на дрожжеподобные грибы).
Норма – желчь стерильна.
При отборе пробы методом дуоденального зондирования не исключено попадание в пробу сапрофитной микрофлоры (т.е. питающейся мертвой, разлагающейся органикой) рта и верхних отделов пищеварительного тракта (глотки, пищевода, желудка).
Если после посева в незначительном количестве дала рост нормальная, условно-патогенная или сопутствующая флора, то исследование на чувствительность к антибиотикам не проводится.
Посев раневого отделяемого и тканей
После проведения исследования пациент получает следующую информацию:
Противомикробные препараты подбираются в зависимости от вида обнаруженных возбудителей.
Попадание в посев микроорганизмов с кожи может вызвать незначительный рост сапрофитных бактерий.
При наличии заболевания происходит значительный рост бактерий, являющихся его причиной. Высокий титр позволяет диагностировать инфекцию. Количество колоний в таком случае превышает 10 000 КОЕ/тампон.
Если обнаружен рост сопутствующей, нормальной или условно-патогенной микрофлоры в количестве, не способном вызвать заболевание, то исследование на чувствительность к антибиотикам не проводится.
Посев отделяемого (соскоба) из глаза
После исследования предоставляются следующая информация:
Выбор антимикробных препаратов, рекомендуемых для проведения лечения, осуществляется исходя из вида выделенных бактерий.
Если есть вероятность грибковой инфекции, то проводится отдельный тест – «Посев на дрожжеподобные грибы».
Результаты интерпретируются следующим образом:
Посев отделяемого половых органов (соскоб)
Информация, предоставляемая после исследования:
Определение антимикробных препаратов осуществляется исходя из вида выделенных бактерий.
Результаты интерпретируются следующим образом:
При выявлении стрептококков Streptococcus agalactiae и Streptococcus pyogenes, являющихся патогенными (вызывающими заболевание), обязательно определяется чувствительность к антибиотикам независимо от количества колоний в единице объема.
Если обнаружен рост сопутствующей, нормальной или условно-патогенной микрофлоры в количестве, не способном вызвать заболевание, то исследование на чувствительность к антибиотикам не проводится.
Посев отделяемого из уха
После проведения исследования пациент получает следующую информацию:
Антимикробные препараты назначаются в зависимости от вида обнаруженных возбудителей.
Нормой является отсутствие роста.
Данный тест не предусматривает определение вида грибов и их чувствительности к противогрибковым препаратам.
Если в посев попали микроорганизмы с кожи, то происходит незначительный рост сапрофитных или условно-патогенных бактерий.
Если имеет место заболевание, то происходит рост бактерий, его вызывающих. Количество колоний в таком случае превышает 100 000 кое.
Если в наличие явные признаки заболевания, а рост при посеве отсутствует, целесообразно повторить отбор материала, т.к. он мог быть собран неправильно или на фоне применения антибиотиков.
Если обнаружен рост сопутствующей, нормальной или условно-патогенной микрофлоры в количестве, не способном вызвать заболевание, то исследование на чувствительность к антибиотикам не проводится.
Посев пункционного материала
После проведения исследования пациенту выдается следующая информация:
Выбор антимикробных препаратов осуществляется в зависимости от вида выявленных микроорганизмов.
Норма – рост отсутствует.
Если в посеве обнаружено присутствие представителей другой микрофлоры, попавших туда случайно из воздуха, с поверхности кожи или каким-то другим образом, об этом тоже сообщается в описании результатов.
В рамках теста не определяется вид грибов и их чувствительность к противогрибковым препаратам.
Если обнаружен рост сопутствующей, нормальной или условно-патогенной микрофлоры в количестве, не способном вызвать заболевание, то исследование на чувствительность к антибиотикам не проводится.
Посев на анаэробную микрофлору
Результат исследования включает в себя информацию о наличии или отсутствии роста бактерий. Положительный ответ подразумевает дополнительное определение чувствительности к антибиотикам.
Норма: рост при посеве отсутствует.
Результат теста выдается на бланке лаборатории медицинской компании «Наука». Пример по данному анализу представлен ниже:
Ф.И.О.: Иванов Сидор Петрович Пол: м Дата рождения: хх.хх.хххх
Дата исследования: хх.хх.хххх
Исследование
Результат
Нормы интерпретации
Примечание
[411] Посев на микрофлору (идентификация агента и чувствительность к аб)
